Guide pratique pour le prélèvement des fluides oraux

Les pandémies récentes (COVID-19 chez l'homme et peste porcine africaine chez le porc) ont confirmé l'importance des informations populationnelles pour comprendre et guider efficacement nos efforts en matière de santé. La collecte de ces informations sur la population porcine a toujours été problématique car les signes cliniques sont très variables et la prise d'échantillon individuel est coûteuse; cependant, l'utilisation des fluides oraux nous offre une alternative simple, efficace et économique pour la surveillance épidémiologique.

Les fluides oraux sont obtenus à partir d'un porc ou d'un groupe de porcs simplement en accrochant une corde de coton dans la case pour qu'ils puissent mordre / mâcher pour, ensuite, récupérer le liquide oral de la corde mouillée. Plus de 27 agents pathogènes, dont la peste porcine africaine (PPA), la peste porcine classique (PPC), la fièvre aphteuse, le circovirus porcin (PCV), le syndrome dysgénésique et respiratoire porcin (SDRP), produisent des niveaux d'acides nucléiques et / ou d'anticorps spécifiques détectables dans les fluides oraux. Aujourd'hui, ce type d'échantillons est couramment utilisé aux États-Unis pour surveiller les populations de porcs; à titre d'exemple, le laboratoire de diagnostic vétérinaire de l'Université d'État de l'Iowa a traité environ 1,4 million d'échantillons de fluides oraux entre 2010 et 2019.

Tout d'abord :

1. Quel est mon objectif sanitaire à long terme ? Comment la surveillance m'aidera-t-elle à atteindre cet objectif ?
2. Comprendre le processus : il existe de nombreuses vidéos en ligne qui décrivent comment et pourquoi échantillonner des fluides oraux.

Prélèvement des fluides oraux :

1. Organisez le matériel : ayez des cordes, des couteaux, des sacs, des tubes, etc., pour chaque bâtiment. Maintenez la biosécurité et évitez de transporter des matériaux d'un bâtiment à un autre.
2. Prélevez des échantillons tôt le matin : les porcs sont plus actifs tôt le matin; Prélevez les échantillons avant de les nourrir.
3. Utilisez la «psychologie» porcine : la première fois, permettez-leur d'interagir avec la corde suspendue assez longtemps pour explorer et apprendre le processus (environ 45 minutes). Si les porcs sont indifférents, jetez au sol un mètre de corde aux extrémités nouées pendant environ 30 minutes. Une fois qu'ils commencent à jouer avec, faites lentement glisser la corde qui guide les animaux jusqu'à l'endroit choisi et suspendez une nouvelle corde pour qu'ils puissent la mâcher. Notez que l'utilisation d'arômes ou d'arômes sur la corde a offert très peu d'avantages dans la pratique.cerdos se aburren con la cuerda y simplemente la ignoran.
4. Quels animaux échantillonner ? Les porcelets avant le sevrage sont prélevés en collectant les fluides oraux "familiaux" (truies et porcelets). Les liquides oraux individuels ou par case peuvent être prélevés sur des porcs âgés de ≥ 21 jours, y compris les truies logées en groupe. Les fluides oraux peuvent être recueillis sur des verrats et des truies logés individuellement, mais nécessitent une formation (voir # 3) et ne sont généralement pas pratiques dans les grands systèmes commerciaux.
5. Tenez-vous en à une routine : accrochez la corde au même endroit au même moment de la journée pour établir une routine. Les porcs apprendront rapidement le processus et sauront exactement quoi faire lors des prélèvements ultérieurs. Une fois qu'un modèle est établi, le temps de collecte peut être réduit à 20 minutes. Ne laissez pas la corde dans la case pendant une période prolongée (heures) car (a) l'échantillon sera perdu avec le temps à mesure que la corde sèche; (b) les porcs sont forts et détruiront la corde si on leur laisse suffisamment de temps; (c) les porcs s'ennuient avec la corde et l'ignorent.
6. Evitez une contamination excessive de l'échantillon : positionner la corde de manière à ce qu'elle soit à hauteur d'épaule des porcs, en évitant qu'elle ne touche le sol. La matière organique n'affecte pas directement les tests de diagnostic (RT-PCR ou ELISA), mais moins l'échantillon contient de matière organique, plus il est facile à traiter en laboratoire.
7. Utilisez un sac et un tube propres pour chaque échantillon : placez l'extrémité humide de la corde dans un sac en plastique, essorez-la et récupérez le liquide dans le tube propre pour l'envoyer au laboratoire (préalablement étiqueté). Retirez les cordes des cases après chaque prélèvement pour conserver la nouveauté (les porcs s'ennuient aussi!)
8. Conservez l'échantillon : refroidir l'échantillon (4 ° C) en le plaçant sur de la glace ou au réfrigérateur immédiatement après le prélèvement. Les calculs basés sur les données de Prickett et al., (2010) estiment une demi-vie de l'ARN du SDRPv dans les liquides oraux d'environ 13 heures à 30 ° C, 42 heures à 20 ° C et 14 jours à <10 ° C. Les anticorps contre le SDRPv n'ont pas été détectés après 72 heures à 30 ° C.

Fluides oraux pour les programmes de surveillance :

1. Combien d'échantillons dois-je prélever et à quelle fréquence ? Nous devons tous nous en tenir à un budget. Ainsi, quelques échantillons, de 2 à 4 cordes par bâtiment (ou pièce), à ​​intervalles déterminés (2-4 semaines), ainsi que les indices de production, nous fourniront un compte rendu éloquent de l'état sanitaire de l'élevage (graphique 1 ).
2. Préparez un plan pour évaluer constamment les informations : une bonne alternative est les diagrammes de contrôle de processus ou SPC.
3. Utilisez un «échantillonnage spatial fixe» pour maximiser la détection dans le bâtiment : une explication pratique de cette méthodologie peut être trouvée en ligne
   1. Prélèvement des fluides oraux (en anglais)
   2. Prélèvement des fluides oraux (en espagnol).
4. Attendez-vous à l'inattendu : prévoyez de vérifier ou d'exclure les résultats de diagnostic inattendus. Par exemple: retester les mêmes échantillons en double, reprèlever les porcs, analyser par une autre méthode, etc.
5. Rappelez-vous l'évolution naturelle des maladies pour établir un plan. Les tests basé sur l'acide nucléique détecteront la présence précoce du virus, tandis que les tests basés sur les anticorps détecteront la réponse immunitaire prolongée qui en résulte. Les deux technologies fonctionnent mieux ensemble pour la surveillance, par exemple, pour autoriser la libération des animaux mis en quarantaine.

Autres considérations :

1. Zèbres et chevaux ... les choses similaires ne sont pas toujours les mêmes : les échantillons qui peuvent sembler similaires aux fluides oraux (par exemple: écouvillons buccaux ou nasaux) peuvent ne pas fournir le même taux de détection. Des exemples pour la grippe A, la fièvre aphteuse, le sénécavirus A et le SDRPv sont présentés dans le tableau 1.
2. Ne mélangez pas (pool) les fluides oraux et ne déplacez pas les cordes d'une case à une autre : au lieu d'améliorer le taux de détection, ces processus peuvent créer de faux négatifs.
3. Évitez la congélation et la décongélation des échantillons ou les changements brusques de température : les anticorps dans les fluides oraux sont assez résistants, mais les acides nucléiques ne le sont pas. Divisez l'échantillon en plusieurs aliquots si vous avez besoin de plusieurs tests. À l'élevage, ne stockez pas les échantillons dans des congélateurs NoFrost, étant donné les fluctuations dues aux cycles de dégivrage automatique. Au laboratoire, décongelez les échantillons au réfrigérateur (4 ° C) et non à température ambiante. Ces pratiques ont montré une meilleure conservation des acides nucléiques (Weiser et al., 2018).

Tableau 1. Comparaison de la détection d'acide nucléique dans les fluides oraux par rapport aux écouvillons buccaux ou nasaux

nd = pas de données.

^aTaux de positivité (moyen) estimé pour les fluides oraux prélevés dans les cases par rapport à un écouvillon buccal ou nasal. Données extraites de Hole et al., (2019); Pepin et al., (2015); Romagosa et al., (2012); Senthilkumaran et al., (2017)