Kit pour prélèvement de fluides oraux

Une de ces techniques est la prise et l'utilisation de fluides oraux (salive) comme échantillon pour le diagnostic chez le porc. Cette technique a déjà été validée expérimentalement pour le SDRP, le PCV2 et la grippe, et elle est couramment utilisée dans les systèmes de production américains pour la détection du SDRPv et de la grippe au niveau de la population. En bref, la technique consiste à suspendre une corde de coton dans une case pour que les porcs la mordent tout en y déposant leur salive (Prickett et al., 2008).

Le kit comprend les éléments suivants:

Corde 100% coton (non traitée avec des produits chimiques), sac en plastique (type Zipplog ®) et tube en plastique stérile avec base conique ou arrondie et avec une capacité suffisante pour le volume de l'échantillon et une paire de gants en latex.

1. Points clés

• Le nombre de cordes nécessaires pour que l'échantillonnage soit représentatif dépendra de la taille de la population, de la répartition des batiments et de la taille des cases (on considère que dans les batiement à un seul étage de 1000 animaux, 6 cordes suffisent pour détecter une prévalence de 10% avec un intervalle de confiance de 95% (Detmer et al., 2010).
• Le diamètre de la corde et la hauteur à laquelle elle doit être placée dépendent de l'âge des animaux, mais elles doivent être facilement accessibles pour l'ensemble du groupe.
• Une période de temps de 30 minutes est suffisante pour que 75% des animaux entrent en contact avec la corde dans une case de 25 à 30 animaux, augmentant à 90% si pendant la même période, nous suspendons deux cordes.
• Avant la collecte, vérifiez que la corde est saturée de salive (cela aidera à déterminer si le temps a été suffisant).

2. Récolte de l'échantillon:

• La partie humide de la corde est coupée et placée dans le sac en plastique propre. La salive est extraite comme indiqué sur les images et l'échantillon est décanté dans les tubes stériles.
• Précautions: L'extraction de la salive doit être faite le plus tôt possible après la collecte des cordes et en essayant de manipuler le moins possible la corde directement avec les mains pour éviter la contamination croisée. Réfrigérer les échantillons rapidement

Prélèvement de fluides oraux

3. Conservation:

- La saleté des échantillons (artefacts) peut interférer dans le résultat du diagnostic. Par conséquent, la salive doit être centrifugée (1000-2000 tr / min / 30 min.) ou au moins permettre pendant 60 min. que les particules de saleté présentes dans l'échantillon soient déposées au fond du tube. Avec le surnageant, procéder à l'analyse ou la conservation.

- Les échantillons doivent être conservés au réfrigérateur (4-10 ° C). A 4 ° C, jusqu'à 12 jours sans que la détection du SDRPv par PCR ne soit altérée . Pour leur conservation, les échantillons doivent être congelés (-20 ° C ou -80 ° C).

4. Analyse:

La détection des agents pathogènes viraux et bactériens est réalisée par le biais de la Polymerase Chain Reaction (PCR). L'ARN viral du SDRP et de la grippe peut être détecté dans la salive à 24 h. post-infection. La détection d'anticorps dirigés contre le SDRPv et le PCV2 peut être réalisée en utilisant le test ELISA et constitue une alternative à la PCR pour réduire les coûts de diagnostic. Cependant, l'isolement viral du SDRPv et du PCV2 n'est pas encore réalisé et dans le cas de la grippe, le pourcentage d'isolement par rapport aux fluides positifs à la PCR orale est de 51%.

5. Avantages et limites de la technique:

La surveillance d'une population par les fluides oraux peut entraîner un coût diagnostique plus faible tout en augmentant le nombre de porcs échantillonnés et, à l'avenir, les agents pathogènes pouvant être détectés.

Le prélèvement des échantillons ne nécessite pas de personnel spécialisé et la nature curieuse des porcs facilite l'échantillonnage, en interagissant et en jouant avec la corde tout en y déposant la salive.

Avec les échantillons de fluides oraux, nous obtenons une plus grande représentativité de la population et la sensibilité pour détecter les infections de faible prévalence (≤10%) est égale ou supérieure aux 30 échantillons individuels traditionnels.

Les échantillons de fluides oraux sont représentatifs au niveau de la population, mais ils ne peuvent jamais remplacer des échantillons individuels pour l'isolement d'un micro-organisme.

Il est très important d'éviter les faux négatifs afin de faire des pools d'échantillons et de vérifier que les échantillons soient traités dans un laboratoire familier avec les techniques de diagnostic sur la salive.

Pour plus d'informations, consultez:

http://vetmed.iastate.edu/vdpam/disease-topics/oral-fluids
http://www.vdl.umn.edu/submission-guidelines/oral-fluids/index.htm